凝膠色譜柱作為高分子分離、分子量測定的核心部件，新手操作時(shí)若忽視細(xì)節(jié)，易導(dǎo)致柱效下降、數(shù)據(jù)偏差甚至柱體損壞。以下梳理5個(gè)高頻誤區(qū)及實(shí)用規(guī)避方案，助力新手規(guī)范操作。?
誤區(qū)一：樣品前處理省略過濾/離心?
新手常直接進(jìn)樣未處理的樣品，若樣品含顆粒雜質(zhì)或未全部溶解的固體，會堵塞色譜柱篩板與孔隙，導(dǎo)致柱壓驟升、峰形拖尾。?
規(guī)避建議：液體樣品需經(jīng)0.22μm濾膜過濾(根據(jù)樣品性質(zhì)選有機(jī)相或水相濾膜)，黏稠或含懸浮顆粒的樣品先離心(8000r/min，5分鐘)，取上清液再過濾，確保樣品無固體雜質(zhì)。?
誤區(qū)二：流速驟升驟降?
為追求實(shí)驗(yàn)速度，新手可能突然調(diào)高流速(如從0.5mL/min直接升至1.5mL/min)，或?qū)嶒?yàn)結(jié)束后瞬間降為0，這會沖擊柱內(nèi)固定相，導(dǎo)致柱床塌陷、分離效率下降。?
規(guī)避建議：流速調(diào)整需循序漸進(jìn)，每次變動幅度不超過0.2mL/min，等待柱壓穩(wěn)定后再繼續(xù)調(diào)整；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，先將流速降至0.1-0.2mL/min，維持5分鐘，再關(guān)閉泵體。?
誤區(qū)三：平衡時(shí)間不足急于進(jìn)樣?
新手常看到基線“看似平穩(wěn)”就急于進(jìn)樣，實(shí)則流動相與柱內(nèi)殘留溶劑未充分平衡，易出現(xiàn)基線漂移、峰面積重復(fù)性差的問題。?
規(guī)避建議：更換流動相后，需根據(jù)柱長平衡(150mm柱平衡30分鐘，300mm柱平衡60分鐘以上)，觀察基線波動范圍(應(yīng)≤0.1mV/h)，同時(shí)進(jìn)樣空白溶劑驗(yàn)證，確認(rèn)無干擾峰后再正式進(jìn)樣。?
誤區(qū)四：實(shí)驗(yàn)后未及時(shí)清洗柱體?
新手可能實(shí)驗(yàn)結(jié)束后直接關(guān)機(jī)，未清洗柱內(nèi)殘留樣品(尤其是含強(qiáng)吸附性組分的樣品)，長期積累會導(dǎo)致固定相污染、柱效不可逆下降。?
規(guī)避建議：實(shí)驗(yàn)后用兼容流動相沖洗(如分析蛋白質(zhì)樣品后，用5%甲醇水溶液沖洗30分鐘；分析有機(jī)溶劑樣品后，用純甲醇沖洗20分鐘)，較后用保存溶劑(如80%甲醇水)沖洗10分鐘，確保柱內(nèi)無殘留。?
誤區(qū)五：關(guān)機(jī)后未妥善保存柱子?
新手關(guān)機(jī)后常忽略柱子保存細(xì)節(jié)，如未密封柱端、暴露在空氣中，導(dǎo)致柱內(nèi)溶劑揮發(fā)、微生物滋生(水相體系)。?
規(guī)避建議：卸下柱子后，立即用堵頭密封兩端(避免用手觸碰柱口)，存放于室溫干燥處(避免陽光直射)；若長期不用，每月需用保存溶劑沖洗一次，防止柱內(nèi)發(fā)霉或固定相干裂。?
掌握以上規(guī)避方法，能有效延長凝膠色譜柱壽命，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)精準(zhǔn)性，新手操作時(shí)需耐心細(xì)致，養(yǎng)成規(guī)范操作習(xí)慣。
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